Monkeypox Virus Real Time PCR Kit
Продукт чоо-жайы
Максаттуу колдонуу
Ал реалдуу убакыт ПТР системаларын колдонуу менен адамдын кан сары суусунун же жабыркашы экссудаттын үлгүлөрүндө маймыл чечек вирусун аныктоо үчүн колдонулат.
Test Principle
Бул продукт Fluorescent зонд негизделген Taqman® реалдуу убакыт ПТР анализ системасы болуп саналат.Атайын праймерлер жана зонддор маймылча вирусунун F3L генин аныктоо үчүн иштелип чыккан.Адамдын сакталган генине багытталган ички контроль жалган-терс натыйжаларды болтурбоо үчүн үлгүлөрдү чогултууну, үлгүлөрдү иштетүүнү жана реалдуу убакытта ПТР процессин көзөмөлдөйт.Комплект толугу менен премикс лиофилизацияланган система болуп саналат, анын ичине маймыл чечек вирусун аныктоо үчүн керектүү материалдарды камтыйт: нуклеин кислотасын күчөтүүчү фермент, UDG ферменти, реакция буфери, спецификалык праймер жана зонд.
Негизги мазмуну
Берилген компоненттер таблицада келтирилген.
| Компоненттер | Пакет | Ингредиент |
| Маймыл чечек вирусуЛиофилизацияланган премикс | 8 тилкелүү ПТР түтүктөрү× 6 баштык | Праймерлер, зонддор, dNTP/dUTP Микс, Mg2+, Так ДНК полимераза, UDG энзим |
| MPV оң башкаруу | 400 мкл × 1 түтүк | Максаттуу генди камтыган ДНК тизмеги |
| MPV терс башкаруу | 400 мкл × 1 түтүк | Адамдын ген сегментин камтыган ДНК тизмеги |
| Эритүүчү чечим | 1 мл × 1 түтүк | Стабилизатор |
| Шайкештик сертификаты | 1 даана | / |
Операция агымы
1. ҮлгүКоллекция:Үлгү стерилдүү түтүктөргө чогултулууга тийиш
стандарттык техникалык мүнөздөмөлөрү менен.
2. Реагент даярдоо (реагент даярдоо аймагы)
Комплекттин компоненттерин алып чыгып, аларды күтүү режиминде колдонуу үчүн бөлмө температурасында тең салмактаңыз.
3. Үлгүлөрдү иштетүү (үлгүлөрдү иштетүү аймагы)
3.1 Нуклеин кислотасын алуу
Вирустук ДНКны экстракциялоо комплекттеринин тиешелүү талаптарына жана процедураларына ылайык нуклеин кислотасын экстракциялоо үчүн 200μL суюктук үлгүлөрүн, Позитивдүү контролду жана Терс контролду алуу сунушталат.
3.2 Лиофилизацияланган порошок эритүүчү жана шаблон кошуу
Маймыл чечек вирусунун лиофилизацияланган премиксин үлгүлөрдүн санына жараша даярдаңыз.Бир үлгүгө Лиофилизацияланган премикс порошок камтыган бир ПТР түтүк керек.Терс контролдоо жана оң башкаруу эки үлгү катары каралышы керек.
(1) Лиофилизацияланган премикс камтыган ар бир ПТР түтүкчөсүнө 15 мкл эритүүчү эритмени кошуңуз, андан кийин ар бир ПТР түтүкчөсүнө 5 мкл экстракцияланган үлгүлөрдү/Терс контролдоо/Оң контролду кошуңуз.
(2) ПТР түтүктөрүн бекем жаап, лиофилизацияланган порошок толугу менен эригенге жана аралашканга чейин ПТР түтүктөрүн кол менен сүртүңүз, суюктукту дароо төмөн ылдамдыкта центрифугалоо жолу менен ПТР түтүкчөлөрүнүн түбүнө чогултуңуз.
(3) Эгерде аныктоо үчүн жалпы реалдуу убакыт ПТР инструменти колдонулса, анда ПТР түтүктөрүн күчөтүү аймагына түздөн-түз өткөрүп бериңиз;Эгерде аныктоо үчүн БТК-8 колдонулса, анда төмөнкү операцияларды аткаруу керек: ПТР түтүкчөсүнөн 10 мкл суюктукту БТК-8 реакциялык чипине өткөрүңүз.Бир ПТР түтүгү чиптеги бир кудукка туура келет.Пипетка иштетүү учурунда пипетка 90 градус вертикалдуу болушун камсыз кылыңыз.Аэрозоль тосмо пипеткасынын учтары скважинанын ортосуна орточо күч менен жайгаштырылышы керек жана пипетканы биринчи тишке жеткенде түртүүнү токтотуу керек (көпүрүктөр пайда болбош үчүн).Скважиналар толтурулгандан кийин, бардык скважиналарды жабуу үчүн реакциялык чиптин мембранасын чыгарыңыз жана чип андан кийин күчөтүүнү аныктоо аймагына өткөрүлөт.
4. ПЦР күчөтүү (аныктоо аймагы)
4.1 ПТР түтүктөрүн/реакция чиптерин реакциялык резервуарга салыңыз жана ар бир реакциянын скважинасынын аталышын тиешелүү тартипте орнотуңуз.
4.2 Флуоресценцияны аныктоонун орнотуулары: (1) Маймыл чечек вирусу (FAM);(2) Ички контроль (CY5).
4.3 Төмөнкү велосипед тебүү протоколун иштетиңиз
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio протоколу:
| Кадамдар | Температура | Убакыт | Циклдер | |
| 1 | Алдын ала денатурация | 95℃ | 2 мүн | 1 |
| 2 | Денатурация | 95℃ | 10 с | 45 |
| Күйүү, узартуу, флуоресценция алуу | 60℃ | 30 с | ||
BTK-8 протоколу:
| Кадамдар | Температура | Убакыт | Циклдер | |
| 1 | Алдын ала денатурация | 95℃ | 2 мүн | 1 |
| 2 | Денатурация | 95℃ | 5 с | 45 |
| Күйүү, узартуу, флуоресценция алуу | 60℃ | 14 с | ||
5. Натыйжаларды талдоо (Аспаптын Колдонуучу Колдонмосун караңыз)
Реакциядан кийин натыйжалар автоматтык түрдө сакталат.Талдоо үчүн "Талдоо" баскычын чыкылдатыңыз жана курал жыйынтык тилкесинде ар бир үлгүнүн Ct маанилерин автоматтык түрдө чечмелейт.Контролдун терс жана оң натыйжалары төмөндөгү "6. Сапатты контролдоо" талаптарына ылайык келүүгө тийиш.
6. Сапатты көзөмөлдөө
6.1 Терс башкаруу: FAM каналында Ct же Ct>40 жок, CY5 каналында Ct≤40 кадимки күчөтүү ийри сызыгы менен.
6.2 Позитивдүү башкаруу: нормалдуу күчөтүү ийри сызыгы менен FAM каналында Ct≤35, Ct≤40 кадимки күчөтүү ийри сызыгы менен CY5 каналында.
6.3 Натыйжа, эгерде жогоруда көрсөтүлгөн бардык критерийлер аткарылса жарактуу болуп саналат.Болбосо, натыйжа жараксыз болуп саналат.
Жыйынтыктын интерпретациясы
Төмөнкү натыйжалар мүмкүн:
| FAM каналынын Ct мааниси | CY5 каналынын Ct мааниси | интерпретация | |
| 1# | Ct же Ct>40 жок | ≤40 | Маймыл чечек вирусу терс |
| 2# | ≤40 | Кандайдыр бир жыйынтык | Маймыл чечек вирусу оң |
| 3# | 40～45 | ≤40 | Кайра сыноо;эгерде ал дагы эле 40~45 болсо, 1# деп кабарлаңыз |
| 4# | Ct же Ct>40 жок | Ct же Ct>40 жок | Жараксыз |
ЭСКЕРТҮҮ: Эгерде жараксыз жыйынтык чыкса, үлгү чогултулуп, кайра текшерилиши керек.
Заказ маалымат
| Продукт аты | Cat.Жок | Өлчөмү | Үлгү | Жарактуулук мөөнөтү | Trans.& Сто.Темп. |
| Monkeypox Virus Real Time PCR Kit | B001P-01 | 48 тест/комплект | Сыворотка/Жазык экссудаты | 12 ай | -25～-15℃ |
